vestnik-bio-msuВестник Московского университета. Серия 16. БиологияVestnik Moskovskogo universiteta. Seriya 16. Biologiya0137-0952Lomonosov Moscow State University, School of Biology10.55959/MSU0137-0952-16-78-1-6vestnik-bio-msu-1211Research ArticleКРАТКИЕ СООБЩЕНИЯSHORT COMMUNICATIONSСравнение антикоагулянтного действия in vitro протеаз, секретируемых микромицетом Aspergillus ochraceus и содержащихся в яде змейComparison of the in vitro anticoagulant action of proteases secreted by the micromycete Aspergillus ochraceus and contained in snake venomhttps://orcid.org/0000-0001-6672-0551ОсмоловскийА. А.OsmolovskiyA. A.

Осмоловский Александр Андреевич – кандидат биологических наук, доц. кафедры микробиологии биологического факультета

119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр.1

Department of Microbiology, Faculty of Biology

Leninskie gory 1–12, Moscow, 119234

 

aosmol@mail.ruДомбекИ.DombeckI.

Домбек Изабель (Isabelle Dombeck) – магистр

70599, Stuttgart, Garbenstraße 13

Faculty of Natural Sciences

Garbenstraße 13, Stuttgart, 70599

 

i.dom@gmx.deХаукеС.HaukeS.

Хауке Себастиан (Sebastian Hauke) – магистр

School of Engineering and Design

85748, Garching, Boltzmann str. 15

School of Engineering and Design

Boltzmann str. 15, Garching, 85748

sebastian.hauke@tum.deОреховаА. В.OrekhovaA. V.

Орехова Анастасия Владимировна – кандидат медицинских наук, научный сотрудник Национального медицинского исследовательского центра терапии и профилактической медицины Минздрава России, вед. инженер кафедры микробиологии биологического факультета МГУ

119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр.1;

101990, г. Москва, Петроверигский пер., д. 10

Department of Microbiology, Faculty of Biology, Lomonosov Moscow State University

Leninskie gory 1–12, Moscow, 119234,

Petroverigsky per., 10, Moscow, 101990

stasya77@list.ruКрейерВ. Г.KreyerV. G.

Крейер Валериана Георгиевна – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник кафедры микробиологии биологического факультета

119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр.1

Department of Microbiology, Faculty of Biology

Leninskie gory 1–12, Moscow, 119234

vkreyer@yandex.ruМосковский государственный университет имени М.В. ЛомоносоваРоссияLomonosov Moscow State UniversityRussian FederationУниверситета ХоэнхаймаГерманияUniversity of HohenheimGermanyМюнхенского технологического университетаГерманияTechnical University of MunichGermanyМосковский государственный университет имени М.В. Ломоносова; ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр терапии и профилактической медицины» Минздрава РоссииРоссияLomonosov Moscow State University; Federal State Budgetary Institution “National Medical Research Center for Therapy and Preventive Medicine” of the Ministry of Health of RussiaRussian Federation2023250320237814348Copyright © Осмоловский А.А., Домбек И., Хауке С., Орехова А.В., Крейер В.Г., 20232023Осмоловский А.А., Домбек И., Хауке С., Орехова А.В., Крейер В.Г.Osmolovskiy A.A., Dombeck I., Hauke S., Orekhova A.V., Kreyer V.G.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestnik-bio-msu.elpub.ru/jour/article/view/1211

Изучено антикоагулянтное действия in vitro протеазы, секретируемой микромицетом Aspergillus ochraceus L-1, и содержащихся в яде змей (препараты Protac® и RVV-X®) протеаз. Показана выраженность действия протеазы микромицета по отношению к плазмам человека и теплокровных животных, а также плазмам человека, дефицитным по определенным факторам системы гемостаза в сопоставлении с протеазами змей в реакциях с хромогенными пептидными субстратами активированного протеина C и фактора X, а также с помощью теста на активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ). Были подобраны оптимальное время прединкубации протеазы микромицета А. ochraceus L-1 с плазмой крови человека (3 мин) и концентрация хромогенного пептидного субстрата активированного протеина C (от 0,1 до 0,5 мг/мл), необходимые для корректного определения протеина C.

The in vitro anticoagulant action of proteases secreted by the micromycete Aspergillus ochraceus L-1 and contained in snakes’ venoms (Protac® and RVV-X® preparations) was studied. The severity of the action of micromycete protease in relation to plasmas of humans and warm-blooded animals, as well as human plasmas deficient in certain factors of the hemostasis system, in comparison with snake proteases in reactions with chromogenic peptide substrates of activated protein C and factor X, as well as using the activated partial thromboplastin time (APTT) test. The optimal time of preincubation of the micromycete A. ochraceus L-1 protease with human blood plasma (3 min) and the concentration of the chromogenic peptide substrate of activated protein C (from 0.1 to 0.5 mg/ml) necessary for the correct determination of protein C with her help.

протеазы яда змейпротеаза Aspergillus ochraceusантикоагулянтные ферментыактиваторы белков гемостазахромогенные пептидные субстратытест АЧТВproteases of snake venomAspergillus ochraceus proteaseanticoagulant enzymeshemostasis protein activatorschromogenic peptide substratesAPTTРабота выполнена при финансовой поддержке Совета по грантам Президента РФ № СП3906.2021.4This work was supported by the Financial Council for Grants of the President of the Russian Federation No. SP-3906.2021.4ReferencesAbdal-Aziz S.A.A., Ali S.M. Molecular characterization and differentiation of proteases isolated from different Aspergillus fungal species // OnLine J. Biol. Sci. 2021. Vol. 21. N 1. P. 69–119.Abdal-Aziz S.A.A., Ali S.M. Molecular characterization and differentiation of proteases isolated from different Aspergillus fungal species // OnLine J. Biol. Sci. 2021. Vol. 21. N 1. P. 69–119.Srilakshmi J., Madhavi J., Lavanya S., Ammani K. Commercial potential of fungal protease: past, present and future prospects // J. Pharm. Chem. Biol. Sci. 2015. Vol. 2. N 4. P. 218–234.Srilakshmi J., Madhavi J., Lavanya S., Ammani K. Commercial potential of fungal protease: past, present and future prospects // J. Pharm. Chem. Biol. Sci. 2015. Vol. 2. N 4. P. 218–234.Osmolovskiy A.A., Zvonareva E.S., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. The effect of micromycete extracellular proteases of Aspergillus genus on the proteins of haemostatic system // Russ. J. Bioorg. Chem. 2014. Vol. 40. N 6. P. 634–639.Osmolovskiy A.A., Zvonareva E.S., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. The effect of micromycete extracellular proteases of Aspergillus genus on the proteins of haemostatic system // Russ. J. Bioorg. Chem. 2014. Vol. 40. N 6. P. 634–639.Осмоловский А.А., Крейер В.Г., Кураков А.В., Баранова Н.А., Пискункова Н.Ф., Егоров Н.С. Микромицеты Aspergillus fiavus и A. oryzae как продуценты протеиназ–активаторов белков системы гемостаза человека // Микол. фитопатол. 2019. Т. 53. № 3. С. 183–185.Осмоловский А.А., Крейер В.Г., Кураков А.В., Баранова Н.А., Пискункова Н.Ф., Егоров Н.С. Микромицеты Aspergillus fiavus и A. oryzae как продуценты протеиназ–активаторов белков системы гемостаза человека // Микол. фитопатол. 2019. Т. 53. № 3. С. 183–185.Osmolovskiy A.A., Şaş B., Aleksandrova A.V., Baranova N.A., Kreyer V.G. Evaluation of the spectrum of proteolytic activity of micromycetes of the genus Aspergillus in relation to proteins of the hemostasis system // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2022. Vol. 77. N 2. P. 133–137.Osmolovskiy A.A., Şaş B., Aleksandrova A.V., Baranova N.A., Kreyer V.G. Evaluation of the spectrum of proteolytic activity of micromycetes of the genus Aspergillus in relation to proteins of the hemostasis system // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2022. Vol. 77. N 2. P. 133–137.Zvonareva E.S., Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Kotova I.B., Egorov N.S. Identification of targets for extracellular proteases activating proteins of the haemostatic system produced by micromycetes Aspergillus ochraceus and Aspergillus terreus // Russ. J. Bioorg. Chem. 2015. Vol. 41. N 5. P. 500–505.Zvonareva E.S., Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Kotova I.B., Egorov N.S. Identification of targets for extracellular proteases activating proteins of the haemostatic system produced by micromycetes Aspergillus ochraceus and Aspergillus terreus // Russ. J. Bioorg. Chem. 2015. Vol. 41. N 5. P. 500–505.Palta S., Saroa R., Palta A. Overview of the coagulation system // Indian J. Anaesth. 2014. Vol. 58. N 5. P. 515–523.Palta S., Saroa R., Palta A. Overview of the coagulation system // Indian J. Anaesth. 2014. Vol. 58. N 5. P. 515–523.Sajevic T., Leonardi A., Križaj I. Haemostatically active proteins in snake venoms // Toxicon. 2011. Vol. 57. N 5. P. 627–645.Sajevic T., Leonardi A., Križaj I. Haemostatically active proteins in snake venoms // Toxicon. 2011. Vol. 57. N 5. P. 627–645.Kunes Y.Z., Sanz M.-C., Tumanova I., Birr C.A., Shi P.Q., Bruguera P., Ruiz J.A., Sanchez-Martinez D. Expression and characterization of a synthetic protein C activator in Pichia pastoris // Protein Expr. Purif. 2002. Vol. 26. P. 406–415.Kunes Y.Z., Sanz M.-C., Tumanova I., Birr C.A., Shi P.Q., Bruguera P., Ruiz J.A., Sanchez-Martinez D. Expression and characterization of a synthetic protein C activator in Pichia pastoris // Protein Expr. Purif. 2002. Vol. 26. P. 406–415.Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Properties of extracellular proteinase – an activator of protein C in blood plasma formed by Aspergillus ochraceus // Appl. Biochem. Microbiol. 2015. Vol. 51. N 1. P. 86–92.Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Properties of extracellular proteinase – an activator of protein C in blood plasma formed by Aspergillus ochraceus // Appl. Biochem. Microbiol. 2015. Vol. 51. N 1. P. 86–92.Осмоловский А.А., Орехова А.В., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С. Возможность применения внеклеточной протеазы микромицета Aspergillus ochraceus ВКМ F-4104D для определения содержания протеина С в плазме крови человека // Биомед. хим. 2018. Т. 64. № 1. С. 115–118.Осмоловский А.А., Орехова А.В., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С. Возможность применения внеклеточной протеазы микромицета Aspergillus ochraceus ВКМ F-4104D для определения содержания протеина С в плазме крови человека // Биомед. хим. 2018. Т. 64. № 1. С. 115–118.Orekhova A.V., Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Possibility for application of extracellular protease of micromycete Aspergillus ochraceus for determining factor X content in human blood plasma // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2019. Vol. 74. N 2. P. 117–120.Orekhova A.V., Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Possibility for application of extracellular protease of micromycete Aspergillus ochraceus for determining factor X content in human blood plasma // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2019. Vol. 74. N 2. P. 117–120.Osmolovskiy A.A., Rukavitsyna E.D., Kreier V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Production of proteinases with fibrinolytic and fibrinogenolytic activity by a micromycete Aspergillus ochraceus // Microbiology. 2017. Vol. 86. N 4. P. 512–516.Osmolovskiy A.A., Rukavitsyna E.D., Kreier V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Production of proteinases with fibrinolytic and fibrinogenolytic activity by a micromycete Aspergillus ochraceus // Microbiology. 2017. Vol. 86. N 4. P. 512–516.Osmolovskiy A.A., Orekhova A.V., Conti E., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Production and stability of the proteinase complex from Aspergillus ochraceus L-1 with fibrinolytic and anticoagulant activity // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2020. Vol. 75. N 3. P. 130–135.Osmolovskiy A.A., Orekhova A.V., Conti E., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Production and stability of the proteinase complex from Aspergillus ochraceus L-1 with fibrinolytic and anticoagulant activity // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2020. Vol. 75. N 3. P. 130–135.Komarevtsev S.K., Popova E.A., Kreyer V.G., Miroshnikov K.A., Osmolovskiy A.A. Purification of the protease activator of protein C of human blood plasma produced by the micromycete Aspergillus ochraceus VKM F-4104D // Appl. Biochem. Microbiol. 2020. Vol. 56. N 1. P. 32–36.Komarevtsev S.K., Popova E.A., Kreyer V.G., Miroshnikov K.A., Osmolovskiy A.A. Purification of the protease activator of protein C of human blood plasma produced by the micromycete Aspergillus ochraceus VKM F-4104D // Appl. Biochem. Microbiol. 2020. Vol. 56. N 1. P. 32–36.Gertler A., Trop M. The elastase-like enzymes from Streptomyces griseus (Pronase). Isolation and partial characterization // Eur. J. Biochem. 1971. Vol. 19. N 1. P. 90–96.Gertler A., Trop M. The elastase-like enzymes from Streptomyces griseus (Pronase). Isolation and partial characterization // Eur. J. Biochem. 1971. Vol. 19. N 1. P. 90–96.Osmolovskiy A.A., Kreier V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Aspergillus ochraceus micromycetes – producers of extracellular proteinases – protein C activators of blood plasma // Appl. Biochem. Microbiol. 2012. Vol. 48. N 5. P. 488–492.Osmolovskiy A.A., Kreier V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Aspergillus ochraceus micromycetes – producers of extracellular proteinases – protein C activators of blood plasma // Appl. Biochem. Microbiol. 2012. Vol. 48. N 5. P. 488–492.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.