vestnik-bio-msuВестник Московского университета. Серия 16. БиологияVestnik Moskovskogo universiteta. Seriya 16. Biologiya0137-0952Lomonosov Moscow State University, School of Biologyvestnik-bio-msu-297Research ArticleВирусологияVirologyМОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ Y-ВИРУСОМ И ВИРУСОМ СКРУЧИВАНИЯ ЛИСТЬЕВ КАРТОФЕЛЯ МЕТОДОМ ИММУНОХРОМАТОГРАФИИMOLECULAR DIAGNOSTICS OF POTATO INFECTIONS WITH PVY AND PLRV BY IMMUNOCHROMATOGRAPHYКондаковаО. А.KondakovaO. A.

канд. биол. наук, ст. науч. сотр. кафедры вирусологии биологического факультета МГУ. Тел.: 8-495-939-50-08

olgakond@yandex.ruБутенкоК. О.ButenkoK. O.

канд. биол. наук, ст. науч. сотр. кафедры вирусологии биологического факультета МГУ. Тел.: 8-495-939-55-29

k002@yandex.ruСкуратЕ. В.SkuratE. V.

канд. биол. наук, ст. науч. сотр. кафедры вирусологии биологического факультета МГУ. Тел.: 8-495-939-33-47

skurat@genebee.msu.ruДрыгинЮ. Ф.DryginYu. F.

докт. хим. наук, зав. лабораторией нуклеиново-белковых взаимодействий НИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского МГУ. Тел.: 8-495-939-55-29

drygin@belozersky.msu.ruКафедра вирусологии, биологический факультет, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12РоссияDepartment of Virology, School of Biology, M.V. Lomonosov Moscow State University, Leninskye gory 1–12, Moscow, 119234, RussiaRussian FederationКафедра вирусологии, биологический факультет, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12РоссияDepartment of Virology, School of Biology, M.V. Lomonosov Moscow State University, Leninskye gory 1–12, Moscow, 119234, RussiaRussian FederationНИИ физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского; Россия, 119992, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 40РоссияA.N. Belozersky Institute of Physico-Chemical Biology, Leninskiye gory 1–40, Moscow, 119992, RussiaRussian Federation201614032016014651Copyright © Кондакова О.А., Бутенко К.О., Скурат Е.В., Дрыгин Ю.Ф., 20162016Кондакова О.А., Бутенко К.О., Скурат Е.В., Дрыгин Ю.Ф.Kondakova O.A., Butenko K.O., Skurat E.V., Drygin Y.F.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestnik-bio-msu.elpub.ru/jour/article/view/297

Для молекулярной диагностики инфекций картофеля Y-вирусом и вирусом скручивания листьев картофеля (ВСЛК) разработаны иммунохроматографические тест-системы. Чтобы размножить антиген — капсидный белок труднодоступного флоэмно-ограниченного ВСЛК, был создан бинарный вектор, содержащий кДНК рекомбинантной РНК тобамовируса, в которой ген капсидного белка был заменен на ген белка оболочки ВСЛК. Рекомбинантная тобамовирусная РНК упаковывалась белком оболочки ВСЛК в сферические вирусные частицы. Химерный вирус был инфекционен, а выход его и белка оболочки ВСЛК при выделении был в 800 раз выше, чем у дикого типа. К химерному вирусу были получены антитела для лабораторного и полевого анализа инфекции картофеля. На основании опыта разработки и применения диагностических тест-систем предлагается тактика рациональной массовой лабораторной и практической диагностики вирусных заболеваний организмов на молекулярном уровне.

Immunochromatography test systems were developed for molecular diagnostics of the potato virus Y and PLRV infection. To increase a low yield of PLRV and raise antibodies against the PLRV antigen, chimerical virus was constructed comprising the PLRV coat protein and recombinant RNA of a tobamovirus, in which capsid protein gene was replaced by the PLRV coat protein gene. Binary vector containing the DNA copy of the recombinant RNA was infectious, and yield of the chimerical virus increased up to 800 times in comparison with the WT PLRV. On the basis of experience in the development of the diagnostics of viral and viroid infections, a rational tactics is proposed for the mass laboratory and field diagnosis of viral infections on the molecular level.

Y-вирус картофелявирус скручивания листьев картофеляхимерный вирусиммунохроматографияинфекциямолекулярная диагностикаpotato virus Ypotato leafroll viruschimerical PLRV virusimmunochromatographyinfectionmolecular diagnosticsReferencesДрыгин Ю.Ф. Детекция целевой последовательности нуклеотидов и целевого антигена // 8-я Всероссийская научно-практическая конференция “Молекулярная диагностика 2014” / М: МБА, 2014. C. 126.Дрыгин Ю.Ф. Детекция целевой последовательности нуклеотидов и целевого антигена // 8-я Всероссийская научно-практическая конференция “Молекулярная диагностика 2014” / М: МБА, 2014. C. 126.Drygin Yu.F., Chirkov S.N., Kondakova O.A., Zinovkin R.A., Ivanov P.A., Blintsov A.N., Gavryushina E.S., Zherdev A.V., Byzova N.A., Dzantiev B.B., Atabekov J.G. Highsensitive technologies for molecular diagnostics of potato virus and viroid infections // Potato Production and Innovative Technologies / Eds. A.J. Haverkort and B.V. Anisimov. Wageningen: Acad. Publishers, 2007. P. 274–285.Drygin Yu.F., Chirkov S.N., Kondakova O.A., Zinovkin R.A., Ivanov P.A., Blintsov A.N., Gavryushina E.S., Zherdev A.V., Byzova N.A., Dzantiev B.B., Atabekov J.G. Highsensitive technologies for molecular diagnostics of potato virus and viroid infections // Potato Production and Innovative Technologies / Eds. A.J. Haverkort and B.V. Anisimov. Wageningen: Acad. Publishers, 2007. P. 274–285.Кондакова О.А., Дрыгин Ю.Ф. Диагностика вироидного заболевания картофеля зондами (диен)Pt-ДНК // Биотехнология. 1999. № 4. С. 83–90.Кондакова О.А., Дрыгин Ю.Ф. Диагностика вироидного заболевания картофеля зондами (диен)Pt-ДНК // Биотехнология. 1999. № 4. С. 83–90.Дрыгин Ю.Ф., Кондакова О.А., Чирков С.Н., Зиновкин Р.А., Киселева В.И., Атабеков И.Г. Способ одновременного обнаружения множества РНК-последовательностей в биологическом образце. Международный патент #WO/2009/123494.Дрыгин Ю.Ф., Кондакова О.А., Чирков С.Н., Зиновкин Р.А., Киселева В.И., Атабеков И.Г. Способ одновременного обнаружения множества РНК-последовательностей в биологическом образце. Международный патент #WO/2009/123494.Takanami Y., Kubo S. Enzyme-assisted purification of two phloem-limited plant viruses: tobacco necrotic dwarf and potato leafroll // J. Gen. Virol. 1979. Vol. 44. N 1. P. 153–159.Takanami Y., Kubo S. Enzyme-assisted purification of two phloem-limited plant viruses: tobacco necrotic dwarf and potato leafroll // J. Gen. Virol. 1979. Vol. 44. N 1. P. 153–159.Weller M.G. Immunochromatographic techniques — a critical review // Fresen. J. Anal. Chem. 2000. Vol. 366. N 6. P. 635–645.Weller M.G. Immunochromatographic techniques — a critical review // Fresen. J. Anal. Chem. 2000. Vol. 366. N 6. P. 635–645.Posthuma-Trumpie T., Korf J., van Amerongen A. Lateral flow (immuno) assay: its strengths, weaknesses, opportunities and threat. A literature survey // Anal. Bioanal. Chem. 2008. Vol. 393. N 2. P. 569–582.Posthuma-Trumpie T., Korf J., van Amerongen A. Lateral flow (immuno) assay: its strengths, weaknesses, opportunities and threat. A literature survey // Anal. Bioanal. Chem. 2008. Vol. 393. N 2. P. 569–582.Zhang G., Guo J., Wang X.. Immunochromatographic lateral flow strip tests // Biosensors and Biodetection. Methods and Protocols / Eds. A. Rasooly and K.E. Herold. NY: Humana Press, 2009. P. 169–183.Zhang G., Guo J., Wang X.. Immunochromatographic lateral flow strip tests // Biosensors and Biodetection. Methods and Protocols / Eds. A. Rasooly and K.E. Herold. NY: Humana Press, 2009. P. 169–183.Wong R., Tse H. Lateral flow immunoassay. NY: Humana Press, 2009. 223 p.Wong R., Tse H. Lateral flow immunoassay. NY: Humana Press, 2009. 223 p.Dzantiev B.B., Byzova N.A., Urusov A.E., Zherdev A.V. Immunochromatographic methods in food analysis // Trends Anal. Chem. 2014. Vol. 55. P. 81–93.Dzantiev B.B., Byzova N.A., Urusov A.E., Zherdev A.V. Immunochromatographic methods in food analysis // Trends Anal. Chem. 2014. Vol. 55. P. 81–93.Drygin Y.F., Blintsov A.N., Osipov A.P., Grigorenko V.G., Andreeva I.P., Uskov A.I., Varitsev Y.A., Anisimov B.V., Novikov V.K., Atabekov J.G. High-sensitivity express immunochromatographic method for detection of plant infection by tobacco mosaic virus // Biochemistry (Mosc.). 2009. Vol. 74. N 9. P. 986–993.Drygin Y.F., Blintsov A.N., Osipov A.P., Grigorenko V.G., Andreeva I.P., Uskov A.I., Varitsev Y.A., Anisimov B.V., Novikov V.K., Atabekov J.G. High-sensitivity express immunochromatographic method for detection of plant infection by tobacco mosaic virus // Biochemistry (Mosc.). 2009. Vol. 74. N 9. P. 986–993.Drygin Yu. F., Blintsov A N., Grigorenko, V.G., Andreeva I.P., Osipov A.P., Varitzev Y.A., Uskov A.I., Kravchenko D.V., Atabekov J.G. High sensitive field test lateral flow immunodiagnostics of PVX infection // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2012. Vol. 93. N 1. P. 179–189.Drygin Yu. F., Blintsov A N., Grigorenko, V.G., Andreeva I.P., Osipov A.P., Varitzev Y.A., Uskov A.I., Kravchenko D.V., Atabekov J.G. High sensitive field test lateral flow immunodiagnostics of PVX infection // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2012. Vol. 93. N 1. P. 179–189.Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. С. 288.Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991. С. 288.Дрыгин Ю.Ф., Скурат Е.В., Кондакова О.А., Атабеков И.Г., Бутенко К.О. Способ получения препаративных количеств вирусных частиц флоэмно-ограниченных вирусов. Патент РФ: 2555534 от 08.06.2015 г.Дрыгин Ю.Ф., Скурат Е.В., Кондакова О.А., Атабеков И.Г., Бутенко К.О. Способ получения препаративных количеств вирусных частиц флоэмно-ограниченных вирусов. Патент РФ: 2555534 от 08.06.2015 г.Дрыгин Ю.Ф. Стратегия и тактика молекулярной диагностики инфекций картофеля на практике // Второе научно-практическое совещание “Генетические и агротехнологические ресурсы повышения качества продовольственного и технического картофеля”. М.: МГУ, 2012. С. 10–11.Дрыгин Ю.Ф. Стратегия и тактика молекулярной диагностики инфекций картофеля на практике // Второе научно-практическое совещание “Генетические и агротехнологические ресурсы повышения качества продовольственного и технического картофеля”. М.: МГУ, 2012. С. 10–11.Бутенко К.О., Скурат Е.В., Кондакова О.А., Варицев Ю.А., Гаврюшина Е.С., Дрыгин Ю.Ф., Атабеков И.Г. Полевой метод диагностики инфекции картофеля вирусом скручивания листьев на тест-полосках с антителами к химерному вирусу // Защита картофеля. 2014. Т. 1. № 1. С. 35–36.Бутенко К.О., Скурат Е.В., Кондакова О.А., Варицев Ю.А., Гаврюшина Е.С., Дрыгин Ю.Ф., Атабеков И.Г. Полевой метод диагностики инфекции картофеля вирусом скручивания листьев на тест-полосках с антителами к химерному вирусу // Защита картофеля. 2014. Т. 1. № 1. С. 35–36.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.