vestnik-bio-msuВестник Московского университета. Серия 16. БиологияVestnik Moskovskogo universiteta. Seriya 16. Biologiya0137-0952Lomonosov Moscow State University, School of Biologyvestnik-bio-msu-301Research ArticleМикробиологияMicrobiologyФИБРИНОЛИТИЧЕСКАЯ И КОЛЛАГЕНОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ПРОТЕИНАЗ ШТАММОВ МИКРОМИЦЕТОВ ASPERGILLUS OCHRACEUS L-1 И ASPERGILLUS USTUS 1FIBRINOLYTIC AND COLLAGENOLYTIC ACTIVITY OF EXTRACELLULAR PROTEINASES OF MICROMYCETES ASPERGILLUS OCHRACEUS L-1 AND ASPERGILLUS USTUS 1ОсмоловскийА. А.OsmolovskiyA. A.

канд. биол. наук, зам. декана, ст. преп. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33

aosmol@mail.ruПоповаЕ. А.PopovaE. A.

науч. сотр. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33

veliania@gmail.comКрейерВ. Г.KreyerV. G.

канд. биол. наук, науч. сотр. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33

vkreyer@yandex.ruБарановаН. А.BaranovaN. A.

канд. биол. наук, ст. науч. сотр. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33

vkreyer@yandex.ruЕгоровН. С.EgorovN. S.

докт. биол. наук, проф. Международного биотехнологического центра МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33

nsegorov21@mail.ruКафедра микробиологии, биологический факультет, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12РоссияDepartment of Microbiology, School of Biology, M.V. Lomonosov Moscow State University, Leninskiye gory 1–12, Moscow, 119234, RussiaRussian FederationМеждународный учебно-научный биотехнологический центр, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12РоссияInternational Biotechnological Center, M.V. Lomonosov Moscow State University, Leninskiye gory 1–12, Moscow, 119234, RussiaRussian Federation201614032016017175Copyright © Осмоловский А.А., Попова Е.А., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С., 20162016Осмоловский А.А., Попова Е.А., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С.Osmolovskiy A.A., Popova E.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestnik-bio-msu.elpub.ru/jour/article/view/301

Показано, что штаммы микромицетов A. ochraceus L-1 и A. ustus 1 различаются по проявлению активности внеклеточных протеиназ при разных значениях рН, а также по выраженности своего действия на фибриллярные белки. Выявлено, что протеиназы A. ochraceus L-1 проявляют максимальную активность при росте продуцента на среде без нитратов (рН ферментативной реакции 8,0), а протеиназы A. ustus 1 проявляют максимальную активность при росте микромицета на среде, содержащей нитрат натрия (рН ферментативной реакции 6,0). Значения удельных фибринолитической и коллагенолитической активностей A. ochraceus L-1 в 2,2 и 1,6 раз больше, чем у A. ustus 1, соответственно, однако A. ustus 1 практически не проявляет общей протеолитической (казеинолитической) активности и обладает высоким соотношением фибринолитической активности и общей протеолитической (казеинолитической) активности (6,92), что делает его перспективным продуцентом протеиназ, расщепляющих фибрин и коллаген.

It was shown that extracellular proteinases produced by micromycetes A. ochraceus L-1 and A. ustus 1 differ by the values of activity at various pH values and the intensity of its effect on fibrillar proteins. It was revealed that the proteinase of A. ochraceus L-1 demonstrated maximum activity during the growth of the producer on nitrate-free growth medium, at pH 8.0, and proteinase of A. ustus 1 showed maximum activity during the growth of the micromycete on a medium containing sodium nitrate, at pH of 6.0. Values of specific fibrinolytic and collagenolytic activities of A. ochraceus L-1 were in 2.2 and 1.6 times greater than those activities of A. ustus 1, but A. ustus 1 showed low values of total proteolytic (caseinolytic) activity and had a high ratio of fibrinolytic activity to total proteolytic (caseinolytic) activity (6.92), making it a promising producer of proteinases which hydrolyze fibrin and collagen.

фибринолитические ферментыколлагенолитические ферментыпротеиназы микромицетовfibrinolytic enzymescollagenolytic enzymesproteinases of micromycetesReferencesZanoelo F.F., Giannesi G.C., Cabral H. Proteolytic enzymes: biochemical properties, production and biotechnological application // Fungal enzymes / Eds. M.L.T.M. Polizeli and M. Rai. Boca Raton: CRC Press, 2013. P. 94–112.Zanoelo F.F., Giannesi G.C., Cabral H. Proteolytic enzymes: biochemical properties, production and biotechnological application // Fungal enzymes / Eds. M.L.T.M. Polizeli and M. Rai. Boca Raton: CRC Press, 2013. P. 94–112.Kotb E. Activity assessment of microbial fibrinolytic enzymes // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2013. Vol. 97. N 15. P. 6647–6665.Kotb E. Activity assessment of microbial fibrinolytic enzymes // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2013. Vol. 97. N 15. P. 6647–6665.Egorov N.S. Microbiological synthesis of proteolytic enzymes possessing fibrinolytic activity // Thrombosis and thrombolysis / Eds. E.I. Chazov and V.N. Smirnov. N.Y.: Consultants Bureau, 1986. P. 197–221.Egorov N.S. Microbiological synthesis of proteolytic enzymes possessing fibrinolytic activity // Thrombosis and thrombolysis / Eds. E.I. Chazov and V.N. Smirnov. N.Y.: Consultants Bureau, 1986. P. 197–221.Nirmal N.P., Shankar S., Laxman R.S. Fungal proteases: An overview // Int. J. Biotech. Biosc. 2011. Vol. 1. N 1. P. 1–40.Nirmal N.P., Shankar S., Laxman R.S. Fungal proteases: An overview // Int. J. Biotech. Biosc. 2011. Vol. 1. N 1. P. 1–40.Ландау Н.С., Кураков А.В., Гуликова О.М., Батомункуева Б.П., Струкова С.М., Егоров Н.С. Экстрацеллюларные протеиназы микромицетов с фибринолитическими и антикоагулянтными свойствами // Микробиология. 1998. Т. 67. № 2. С. 215–220.Ландау Н.С., Кураков А.В., Гуликова О.М., Батомункуева Б.П., Струкова С.М., Егоров Н.С. Экстрацеллюларные протеиназы микромицетов с фибринолитическими и антикоагулянтными свойствами // Микробиология. 1998. Т. 67. № 2. С. 215–220.Клечковская В.В., Егоров Н.С. О плазмокоагулирующей и фибринолитической активностях грибов рода Aspergillus // Микробиология. 1983. Т. 52. № 3. С. 396–403.Клечковская В.В., Егоров Н.С. О плазмокоагулирующей и фибринолитической активностях грибов рода Aspergillus // Микробиология. 1983. Т. 52. № 3. С. 396–403.Osmolovskiy A.A., Kreier V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Aspergillus ochraceus micromycetes — producers of extracellular proteinases — protein C activators of blood plasma // Appl. Biochem. Microbiol. 2012. Vol. 48. N 5. P. 488–492.Osmolovskiy A.A., Kreier V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Aspergillus ochraceus micromycetes — producers of extracellular proteinases — protein C activators of blood plasma // Appl. Biochem. Microbiol. 2012. Vol. 48. N 5. P. 488–492.Osmolovskiy A.A., Zvonareva E.S., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. The effect of micromycete extracellular proteases of the Aspergillus genus on the proteins of haemostatic system // Russ. J. Bioorg. Chem. 2014. Vol. 40. N 6. P. 634–639.Osmolovskiy A.A., Zvonareva E.S., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. The effect of micromycete extracellular proteases of the Aspergillus genus on the proteins of haemostatic system // Russ. J. Bioorg. Chem. 2014. Vol. 40. N 6. P. 634–639.Sukhosyrova E.A, Nikitina Z.K., Yakovleva M.B., Veshchikova E.V., Bykov V.A. Characteristics of collagenolytic enzymes secreted by deuteromycete fungi Aspergillus flavus // Bull. Exp. Biol. Med. 2003. Vol. 135. N 5. P. 447–451.Sukhosyrova E.A, Nikitina Z.K., Yakovleva M.B., Veshchikova E.V., Bykov V.A. Characteristics of collagenolytic enzymes secreted by deuteromycete fungi Aspergillus flavus // Bull. Exp. Biol. Med. 2003. Vol. 135. N 5. P. 447–451.Barthomeuf C. Pourrat H., Pourrat A. Collagenolyticof a new semi-alkaline protease from Aspergillus niger // J. Ferment. Bioeng. 1992. Vol. 73. N 3. P. 233–236.Barthomeuf C. Pourrat H., Pourrat A. Collagenolyticof a new semi-alkaline protease from Aspergillus niger // J. Ferment. Bioeng. 1992. Vol. 73. N 3. P. 233–236.Schirasaka N., Naitou M., Okamura K., Kusuda M.,Fukuta Y., Terashita T. Purification and characterization of a fibrinolytic protease from Aspergillus oryzae KSK-3 // Mycoscience. 2012. Vol. 53. N 5. P. 354–364.Schirasaka N., Naitou M., Okamura K., Kusuda M.,Fukuta Y., Terashita T. Purification and characterization of a fibrinolytic protease from Aspergillus oryzae KSK-3 // Mycoscience. 2012. Vol. 53. N 5. P. 354–364.El-Aassar S.A., El-Badry H.M., Abdel-Fattah A.F. The biosynthesis of proteases with fibrinolytic activity in immobilized cultures of Penicillium chrysogenum H9 // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990. Vol. 33. N 1. P. 26–30.El-Aassar S.A., El-Badry H.M., Abdel-Fattah A.F. The biosynthesis of proteases with fibrinolytic activity in immobilized cultures of Penicillium chrysogenum H9 // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990. Vol. 33. N 1. P. 26–30.Попова Е.А., Крейер В.Г., Осмоловский А.А., Егоров Н.С. Получение препарата коллагенолитической протеиназы, образуемой Aspergillus ustus в условиях глубинного и твердофазного культивирования // Усп. мед. микологии. 2014. Т. 12. С. 333–335.Попова Е.А., Крейер В.Г., Осмоловский А.А., Егоров Н.С. Получение препарата коллагенолитической протеиназы, образуемой Aspergillus ustus в условиях глубинного и твердофазного культивирования // Усп. мед. микологии. 2014. Т. 12. С. 333–335.Sharkova T.S., Kurakov A.V., Osmolovskiy A.A., Matveeva E.O., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Screening of producers of proteinases with fibrinolytic and collagenolytic activities among micromycetes // Microbiology. 2015. Vol. 84. N 3. P. 359–364.Sharkova T.S., Kurakov A.V., Osmolovskiy A.A., Matveeva E.O., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Screening of producers of proteinases with fibrinolytic and collagenolytic activities among micromycetes // Microbiology. 2015. Vol. 84. N 3. P. 359–364.Batomunkueva B.P., Egorov N.S. Isolation, purification and resolution of the extracellular proteinase complex of Aspergillus ochraceus 513 with fibrinolytic and anticoagulant activities // Microbiology. 2001. Vol. 70. N 5. P. 519–522.Batomunkueva B.P., Egorov N.S. Isolation, purification and resolution of the extracellular proteinase complex of Aspergillus ochraceus 513 with fibrinolytic and anticoagulant activities // Microbiology. 2001. Vol. 70. N 5. P. 519–522.Hagihara B., Matbara H., Nakai M., Okunuk K. Crystalline bacterial proteinase. I. Preparation of crystalline proteinase of Bacillus subtilis // J. Biochem. 1958. Vol. 45. N 3. P. 185–194.Hagihara B., Matbara H., Nakai M., Okunuk K. Crystalline bacterial proteinase. I. Preparation of crystalline proteinase of Bacillus subtilis // J. Biochem. 1958. Vol. 45. N 3. P. 185–194.Егоров Н.С., Ландау Н.С., Буяк Л.И., Крейер В.Г. Гидролитическая система нокардиоформной бактерии Nocardia minima в процессе ее роста, развития и дифференциации // Микробиология. 1991. Т. 60. № 4. С. 637–643.Егоров Н.С., Ландау Н.С., Буяк Л.И., Крейер В.Г. Гидролитическая система нокардиоформной бактерии Nocardia minima в процессе ее роста, развития и дифференциации // Микробиология. 1991. Т. 60. № 4. С. 637–643.Mukherjee A.K., Rai C.K., Thakur R., Chattopadhyay P., Kar S.K. Bafibrinase: a non-toxic, non-hemorrhagic, directacting fibrinolytic serine protease from Bacillus sp. strain AS-S20-I exhibits in vivo anticoagulant activity and thrombolytic potency // Biochimie. 2012. Vol. 94. N 6. P. 1300–1308.Mukherjee A.K., Rai C.K., Thakur R., Chattopadhyay P., Kar S.K. Bafibrinase: a non-toxic, non-hemorrhagic, directacting fibrinolytic serine protease from Bacillus sp. strain AS-S20-I exhibits in vivo anticoagulant activity and thrombolytic potency // Biochimie. 2012. Vol. 94. N 6. P. 1300–1308.Bollag D.M., Edelstein S.J. Protein Methods. N.Y.: Wiley-Liss Inc., 1991. P. 72–73.Bollag D.M., Edelstein S.J. Protein Methods. N.Y.: Wiley-Liss Inc., 1991. P. 72–73.Gertler A., Trop M. The elastase-like enzymes from Streptomyces griseus (Pronase). Isolation and partial characterization // Eur. J. Biochem. 1971. Vol. 9. N 1. P. 90–96.Gertler A., Trop M. The elastase-like enzymes from Streptomyces griseus (Pronase). Isolation and partial characterization // Eur. J. Biochem. 1971. Vol. 9. N 1. P. 90–96.Osmolovsky A.A, Kreier V.G., Baranova N.A., Kurakov A.V., Egorov N.S. Production of extracellular proteinases — protein C activators of blood plasma — by the micrimycete Aspergillus ochraceus during submerged and solid-state fermentation // Appl. Biochem. Microbiol. 2013. Vol. 49. N 6. P. 581–586.Osmolovsky A.A, Kreier V.G., Baranova N.A., Kurakov A.V., Egorov N.S. Production of extracellular proteinases — protein C activators of blood plasma — by the micrimycete Aspergillus ochraceus during submerged and solid-state fermentation // Appl. Biochem. Microbiol. 2013. Vol. 49. N 6. P. 581–586.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.