Сравнение антикоагулянтного действия in vitro протеаз, секретируемых микромицетом Aspergillus ochraceus и содержащихся в яде змей

Изучено антикоагулянтное действия in vitro протеазы, секретируемой микромицетом Aspergillus ochraceus L-1, и содержащихся в яде змей (препараты Protac® и RVV-X®) протеаз. Показана выраженность действия протеазы микромицета по отношению к плазмам человека и теплокровных животных, а также плазмам человека, дефицитным по определенным факторам системы гемостаза в сопоставлении с протеазами змей в реакциях с хромогенными пептидными субстратами активированного протеина C и фактора X, а также с помощью теста на активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ). Были подобраны оптимальное время прединкубации протеазы микромицета А. ochraceus L-1 с плазмой крови человека (3 мин) и концентрация хромогенного пептидного субстрата активированного протеина C (от 0,1 до 0,5 мг/мл), необходимые для корректного определения протеина C.

1. Abdal-Aziz S.A.A., Ali S.M. Molecular characterization and differentiation of proteases isolated from different Aspergillus fungal species // OnLine J. Biol. Sci. 2021. Vol. 21. N 1. P. 69–119.

2. Srilakshmi J., Madhavi J., Lavanya S., Ammani K. Commercial potential of fungal protease: past, present and future prospects // J. Pharm. Chem. Biol. Sci. 2015. Vol. 2. N 4. P. 218–234.

3. Osmolovskiy A.A., Zvonareva E.S., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. The effect of micromycete extracellular proteases of Aspergillus genus on the proteins of haemostatic system // Russ. J. Bioorg. Chem. 2014. Vol. 40. N 6. P. 634–639.

4. Осмоловский А.А., Крейер В.Г., Кураков А.В., Баранова Н.А., Пискункова Н.Ф., Егоров Н.С. Микромицеты Aspergillus fiavus и A. oryzae как продуценты протеиназ–активаторов белков системы гемостаза человека // Микол. фитопатол. 2019. Т. 53. № 3. С. 183–185.

5. Osmolovskiy A.A., Şaş B., Aleksandrova A.V., Baranova N.A., Kreyer V.G. Evaluation of the spectrum of proteolytic activity of micromycetes of the genus Aspergillus in relation to proteins of the hemostasis system // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2022. Vol. 77. N 2. P. 133–137.

6. Zvonareva E.S., Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Kotova I.B., Egorov N.S. Identification of targets for extracellular proteases activating proteins of the haemostatic system produced by micromycetes Aspergillus ochraceus and Aspergillus terreus // Russ. J. Bioorg. Chem. 2015. Vol. 41. N 5. P. 500–505.

7. Palta S., Saroa R., Palta A. Overview of the coagulation system // Indian J. Anaesth. 2014. Vol. 58. N 5. P. 515–523.

8. Sajevic T., Leonardi A., Križaj I. Haemostatically active proteins in snake venoms // Toxicon. 2011. Vol. 57. N 5. P. 627–645.

9. Kunes Y.Z., Sanz M.-C., Tumanova I., Birr C.A., Shi P.Q., Bruguera P., Ruiz J.A., Sanchez-Martinez D. Expression and characterization of a synthetic protein C activator in Pichia pastoris // Protein Expr. Purif. 2002. Vol. 26. P. 406–415.

10. Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Properties of extracellular proteinase – an activator of protein C in blood plasma formed by Aspergillus ochraceus // Appl. Biochem. Microbiol. 2015. Vol. 51. N 1. P. 86–92.

11. Осмоловский А.А., Орехова А.В., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С. Возможность применения внеклеточной протеазы микромицета Aspergillus ochraceus ВКМ F-4104D для определения содержания протеина С в плазме крови человека // Биомед. хим. 2018. Т. 64. № 1. С. 115–118.

12. Orekhova A.V., Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Possibility for application of extracellular protease of micromycete Aspergillus ochraceus for determining factor X content in human blood plasma // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2019. Vol. 74. N 2. P. 117–120.

13. Osmolovskiy A.A., Rukavitsyna E.D., Kreier V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Production of proteinases with fibrinolytic and fibrinogenolytic activity by a micromycete Aspergillus ochraceus // Microbiology. 2017. Vol. 86. N 4. P. 512–516.

14. Osmolovskiy A.A., Orekhova A.V., Conti E., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Production and stability of the proteinase complex from Aspergillus ochraceus L-1 with fibrinolytic and anticoagulant activity // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2020. Vol. 75. N 3. P. 130–135.

15. Komarevtsev S.K., Popova E.A., Kreyer V.G., Miroshnikov K.A., Osmolovskiy A.A. Purification of the protease activator of protein C of human blood plasma produced by the micromycete Aspergillus ochraceus VKM F-4104D // Appl. Biochem. Microbiol. 2020. Vol. 56. N 1. P. 32–36.

16. Gertler A., Trop M. The elastase-like enzymes from Streptomyces griseus (Pronase). Isolation and partial characterization // Eur. J. Biochem. 1971. Vol. 19. N 1. P. 90–96.

17. Osmolovskiy A.A., Kreier V.G., Kurakov A.V., Baranova N.A., Egorov N.S. Aspergillus ochraceus micromycetes – producers of extracellular proteinases – protein C activators of blood plasma // Appl. Biochem. Microbiol. 2012. Vol. 48. N 5. P. 488–492.