КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ БИОХИМИЧЕСКИХ И КИНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ДНК-МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ M1.BspACI
https://doi.org/10.1234/XXXX-XXXX-2011-2-38-40
Аннотация
Гены ДНК-метилтрансфераз системы рестрикции-модификации BspACI из Bacillus psychrodurans AC клонировали в клетках E. coli. Анализ аминокислотных последовательностей белков, кодируемых этими генами, показал, что они оба относятся к классу С5 ДНК-метилтрансфераз. Ген M1.BspACI субклонировали в составе экспрессирующего вектора pJW2. Препарат высокоочищенного рекомбинантного фермента получали с помощью хроматографии на различных носителях. Установлено, что M1.BspACI модифицирует первый цитозин в последовательности 5ґ-CCGC-3ґ. Определены кинетические параметры реакции метилирования ДНК ферментом и показано, что каталитическая константа оказалась равной 0,095 ± 0,002 мин–1, Km ДНК фага — 0,053 ± 0,007 мкМ, Km SAM — 5,1 ± 0,3 мкМ.
Об авторах
М. В. Тарасова
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск;
Новосибирский государственный университет, г. Новосибирск
Россия
Россия
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск; Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Новосибирский государственный университет (НГУ), Новосибирск.
В. В. Кузнецов
ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора, Кольцово, Новосибирская обл.
Россия
Россия
ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребназдора, Кольцово, Новосибирская обл.
Н. А. Нетесова
ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора, Кольцово, Новосибирская обл.
Россия
Россия
канд. биол. наук, ФГУН Государственный науч- ный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребназдора, Кольцово, Новосибирская обл.
Д. А. Гончар
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск
Россия
Россия
канд. биол. наук, Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск.
С. Х. Дегтярев
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск;
Россия
Россия
докт. биол. наук, проф., Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск.
Список литературы
1. Тарасова М.В. и др. Новая сайт-специфическая эндонуклеаза BspACI из Bacillus psychrodurans AC узнает последовательность 5ґ-CCGC-3ґ/3ґ-GGCG-5ґ // Вестн. биотехнол. и физ.-хим. биол. 2010. Т. 5. № 1. С. 16—24.
2. Sambrook J. et al. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. 1659 с.
3. Чернухин В.А. и др. Рекомбинантная ДНК-метилтрансфераза M2.BstSEI из никазнометилазной системы NM.BstSEI: получение и свойства // Мол. биол. 2009. Т. 43. № 1. С. 10—18.
4. Kossykh V.G. et al. Function of Pro-185 in the ProCys of conserved motif IV in the EcoRII [cytosine-C5]-DNA me- thyltransferase // FEBS Lett. 1995. Vol. 370. N 1—2. P. 75—77.
5. Lee K.F. et al. Overproduction, purification and characterization of M.EcoHK31I, a bacterial methyltransferase with two polypeptides // Biochem. J. 1996. Vol. 314. N 1. P. 321—326.
6. Bhattacharya S.K. et al. Kinetic mechanism of cytosine DNA methyltransferase MspI // J. Biol.Chem. 1999. Vol. 274. N 21. P. 14743—14749.
Рецензия
Для цитирования:
Тарасова М.В., Кузнецов В.В., Нетесова Н.А., Гончар Д.А., Дегтярев С.Х. КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ БИОХИМИЧЕСКИХ И КИНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ДНК-МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ M1.BspACI. Вестник Московского университета. Серия 16. Биология. 2011;(2):38-40. https://doi.org/10.1234/XXXX-XXXX-2011-2-38-40
For citation:
Tarasova M.V., Kuznetsov V.V., Netesova N.A., Gonchar D.А., Degtyarev S.Kh. CLONING AND ANALYSIS OF BIOCHEMICAL AND CATALYTIC PROPERTIES OF DNA METHYLTRANSFERASE M1.BspACI. Vestnik Moskovskogo universiteta. Seriya 16. Biologiya. 2011;(2):38-40. (In Russ.) https://doi.org/10.1234/XXXX-XXXX-2011-2-38-40
Просмотров:
289
Послать статью по эл. почте 