CLONING AND ANALYSIS OF BIOCHEMICAL AND CATALYTIC PROPERTIES OF DNA METHYLTRANSFERASE M1.BspACI
https://doi.org/10.1234/XXXX-XXXX-2011-2-38-40
Abstract
Genes coding for the DNA methyltransferases of restriction-modification system BspACI from Bacillus psychrodurans AC have been cloned in E. coli cells. The analysis of amino acid se- quences of the proteins showed that both these genes belong to C5 DNA methyltransferases. Gene bspACIM1 has been subcloned in pJW2 vector. High-purity recombinant enzyme has been obtained with chromatography on different carriers. It has been shown that M1.BspACI modifies the first cytosine residue in the sequence 5ґ-CCGC-3ґ. Kinetic parameters have been determined. The cata- lytic constant appears to be 0,095 ± 0,002 min–1, Km ДНК фага — 0,053 ± 0,007 мкМ, Km SAM — 5,1 ± 0,3 мкМ.
About the Authors
M. V. Tarasova
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск;
Новосибирский государственный университет, г. Новосибирск
Russian Federation
Russian Federation
V. V. Kuznetsov
ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора, Кольцово, Новосибирская обл.
Russian Federation
Russian Federation
N. A. Netesova
ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора, Кольцово, Новосибирская обл.
Russian Federation
Russian Federation
D. А. Gonchar
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск
Russian Federation
Russian Federation
S. Kh. Degtyarev
Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск;
Russian Federation
Russian Federation
References
1. Тарасова М.В. и др. Новая сайт-специфическая эндонуклеаза BspACI из Bacillus psychrodurans AC узнает последовательность 5ґ-CCGC-3ґ/3ґ-GGCG-5ґ // Вестн. биотехнол. и физ.-хим. биол. 2010. Т. 5. № 1. С. 16—24.
2. Sambrook J. et al. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989. 1659 с.
3. Чернухин В.А. и др. Рекомбинантная ДНК-метилтрансфераза M2.BstSEI из никазнометилазной системы NM.BstSEI: получение и свойства // Мол. биол. 2009. Т. 43. № 1. С. 10—18.
4. Kossykh V.G. et al. Function of Pro-185 in the ProCys of conserved motif IV in the EcoRII [cytosine-C5]-DNA me- thyltransferase // FEBS Lett. 1995. Vol. 370. N 1—2. P. 75—77.
5. Lee K.F. et al. Overproduction, purification and characterization of M.EcoHK31I, a bacterial methyltransferase with two polypeptides // Biochem. J. 1996. Vol. 314. N 1. P. 321—326.
6. Bhattacharya S.K. et al. Kinetic mechanism of cytosine DNA methyltransferase MspI // J. Biol.Chem. 1999. Vol. 274. N 21. P. 14743—14749.
Review
For citations:
Tarasova M.V., Kuznetsov V.V., Netesova N.A., Gonchar D.А., Degtyarev S.Kh. CLONING AND ANALYSIS OF BIOCHEMICAL AND CATALYTIC PROPERTIES OF DNA METHYLTRANSFERASE M1.BspACI. Vestnik Moskovskogo universiteta. Seriya 16. Biologiya. 2011;(2):38-40. (In Russ.) https://doi.org/10.1234/XXXX-XXXX-2011-2-38-40
Views:
293
Email this article 